?????? RNA干擾(RNAi)是一種RNA介導(dǎo)的基因沉默機(jī)制。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,可通過轉(zhuǎn)入能與目的基因配對(duì)的雙鏈RNA來實(shí)現(xiàn),如siRNA、短發(fā)夾RNA(shRNA)。目前,主流的方法是將shRNA構(gòu)建于載體中,利用細(xì)胞內(nèi)的Dicer酶生成相應(yīng)的siRNA,發(fā)揮RNAi的作用。一方面,shRNA慢病毒載體比體外合成的siRNA更為穩(wěn)定,另一方面,經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后,可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系如原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞和處于非分裂狀態(tài)的細(xì)胞,并且在感染后可以整合到受感染細(xì)胞的基因組,進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定表達(dá)。
原理:
? ? ? ?我們的RNAi抑制載體構(gòu)建基于慢病毒表達(dá)系統(tǒng),一般采用U6啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的pLKOG載體。
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技術(shù)路線:
1.shRNA靶點(diǎn)設(shè)計(jì)。
2.慢病毒載體插入靶點(diǎn)基因。
3.轉(zhuǎn)化培養(yǎng)。
4.克隆篩選及鑒定。
5.無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒提取。? ??
客戶需提供:
1.miRNA、LncRNA、circRNA信息。如:已知NCBI編號(hào),基因序列。
我們的服務(wù):
1.靶點(diǎn)基因片段合成。
2.載體設(shè)計(jì)。
3.抑制構(gòu)建及鑒定報(bào)告。
4.出貨質(zhì)粒,甘油菌。
5.載體更換。
pLKOG抑制載體圖譜