1、實(shí)驗(yàn)原理（細(xì)胞凋亡檢測的方法很多，我們采用的哪種？Annexin V/PI雙染法嗎）

? ? ?細(xì)胞凋亡(Cell apoptosis)是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡，亦稱為程序性細(xì)胞死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用，它并不是病理?xiàng)l件下的損傷，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。

? ? ?Annexin V(或 Annexin A5)為胞內(nèi)蛋白膜聯(lián)蛋白家族成員，以鈣依賴的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合。PS存在于正常細(xì)胞漿膜的內(nèi)層，但在凋亡早期，膜不對稱性喪失，PS 易位至細(xì)胞表面。熒光標(biāo)記的 Annexin V可與之特異性結(jié)合，表明該細(xì)胞為凋亡細(xì)胞。

機(jī)械損傷（Q1）：細(xì)胞膜破損嚴(yán)重，Annexin V-APC染不上。

晚期凋亡（Q2）：細(xì)胞膜已經(jīng)受損，7-AAD（ECD-A）與Annexin V-APC染料可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與DNA結(jié)合，不可逆轉(zhuǎn)。

早期凋亡（Q3）：細(xì)胞只有磷脂酰絲氨酸PS外翻，細(xì)胞膜完整，對7-AAD（ECD-A）拒染，可逆轉(zhuǎn)

活細(xì)胞（Q4）：對Annexin V-APC和7-AAD（ECD-A）都拒染

2、技術(shù)應(yīng)用

? ? ?檢測藥物、基因或蛋白等對細(xì)胞凋亡的影響。

3、實(shí)驗(yàn)步驟

? ? ?1.細(xì)胞培養(yǎng)及種板；2.收集細(xì)胞及計數(shù)；3.孵育染料；4.流式細(xì)胞儀檢測；5. Flowjo分析結(jié)果

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4、實(shí)驗(yàn)步驟

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客戶提供：細(xì)胞株（凍存株或培養(yǎng)細(xì)胞）及處理用的藥物，細(xì)胞培養(yǎng)基信息，細(xì)胞特殊處理方式

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